Satu dunia satu perjuangan
─Kerjasama antarabangsa untuk membina komuniti global yang mempunyai nasib bersama yang bertindak balas terhadap cabaran pandemik COVID-19
Novel coronavirus yang melanda seluruh dunia telah mengakibatkan krisis pandemik COVID-19 global yang berterusan.Novel coronavirus tidak mempunyai sempadan, tidak ada negara yang akan terlepas daripada pertempuran melawan COVID-19 ini.Sebagai tindak balas kepada pandemik COVID-19 di seluruh dunia ini, Liming Bio-Products Corp membuat sumbangan untuk menyokong kesejahteraan komuniti global kami.
Dunia kita kini berdepan dengan impak yang belum pernah berlaku sebelum ini daripada wabak penyakit coronavirus novel 2019 (COVID-19).Sehingga kini, tiada ubat yang berkesan untuk merawat penyakit ini.Walau bagaimanapun, banyak ujian diagnostik telah dibangunkan untuk pengesanan COVID-19.Ujian ini berdasarkan kaedah molekul atau serologi untuk mengesan asid nukleik atau biomarker antibodi khusus coronavirus novel.Memandangkan COVID-19 telah mencapai status pandemik, diagnosis awal jangkitan novel coronavirus adalah penting dalam menilai penyebaran virus dan membendungnya, tetapi ujian yang sempurna untuk kegunaan sejagat belum wujud.Kita perlu tahu apakah ujian yang berpotensi digunakan untuk pemeriksaan, diagnosis dan pemantauan jangkitan COVID-19, dan apakah batasannya.Adalah sangat penting bagaimana untuk menggunakan alat saintifik ini dengan lebih baik dan untuk membantu mengenal pasti dan mengawal kemunculan penyakit yang cepat merebak dan serius ini.
Tujuan pengesanan novel coronavirus adalah untuk menentukan sama ada individu yang mempunyai jangkitan COVID-19 atau pembawa asimptotik yang mungkin menyebarkan virus secara senyap, untuk memberikan maklumat penting untuk membimbing membuat keputusan bagi rawatan klinikal.Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa 70% keputusan klinikal bergantung pada keputusan ujian.Apabila kaedah pengesanan berbeza digunakan, keperluan kit reagen pengesanan juga berbeza.
Rajah 1
Rajah 1:Gambar rajah menunjukkan peringkat utama tahap biomarker umum semasa tempoh masa biasa jangkitan COVID-19.Paksi X menunjukkan bilangan hari jangkitan, dan paksi Y menunjukkan beban virus, kepekatan antigen, dan kepekatan antibodi dalam tempoh yang berbeza.Antibodi merujuk kepada antibodi IgM dan IgG.Kedua-dua RT-PCR dan pengesanan antigen digunakan untuk mengesan kehadiran atau ketiadaan novel coronavirus, yang merupakan bukti langsung untuk pengesanan awal pesakit.Dalam masa seminggu selepas jangkitan virus, pengesanan PCR atau pengesanan antigen lebih diutamakan.Selepas jangkitan novel coronavirus selama kira-kira 7 hari, antibodi IgM terhadap novel coronavirus telah meningkat secara beransur-ansur dalam darah pesakit, tetapi tempoh kewujudan adalah pendek, dan kepekatannya berkurangan dengan cepat.Sebaliknya, antibodi IgG terhadap virus muncul kemudian, biasanya kira-kira 14 hari selepas jangkitan virus.Kepekatan IgG secara beransur-ansur meningkat, dan ia berterusan dalam tempoh yang lama dalam darah.Oleh itu, jika IgM dikesan dalam darah pesakit, ia bermakna virus baru-baru ini dijangkiti, yang merupakan penanda jangkitan awal.Apabila antibodi IgG dikesan dalam darah pesakit, bermakna jangkitan virus telah lama.Ia juga dipanggil jangkitan lewat atau jangkitan sebelumnya.Ia sering dilihat pada pesakit yang dalam fasa pemulihan.
Penanda bio coronavirus novel
Koronavirus novel ialah virus RNA, yang terdiri daripada protein dan asid nukleik.Virus ini menyerang badan perumah (manusia), memasuki sel melalui tapak pengikat yang sepadan dengan reseptor ACE2, dan mereplikasi dalam sel perumah, menyebabkan sistem imun manusia bertindak balas kepada penceroboh asing dan menghasilkan antibodi khusus.Oleh itu, asid nukleik dan antigen botol, dan antibodi khusus terhadap novel coronavirus secara teorinya boleh digunakan sebagai biomarker khusus untuk pengesanan novel coronavirus.Untuk pengesanan asid nukleik, teknologi RT-PCR adalah yang paling biasa digunakan, manakala kaedah serologi biasanya digunakan untuk pengesanan antibodi khusus coronavirus novel.Pada masa ini, terdapat pelbagai kaedah ujian tersedia yang boleh kami pilih untuk menguji jangkitan COVID-19 [1].
Prinsip asas kaedah ujian utama untuk novel coronavirus
Banyak ujian diagnostik untuk COVID_19 tersedia setakat ini, dengan lebih banyak kit ujian menerima kelulusan di bawah kebenaran penggunaan kecemasan setiap hari.Walaupun perkembangan ujian baharu keluar dengan begitu banyak nama dan format yang berbeza, semua ujian COVID_19 semasa pada asasnya bergantung pada dua teknologi utama: pengesanan asid nukleik untuk RNA virus dan immunoassay serologi yang mengesan antibodi khusus virus (IgM dan IgG).
01. Pengesanan asid nukleik
Reverse transcription-polimerase chain reaction (RT-PCR), loop-mediated isothermal amplification (LAMP), dan penjujukan generasi seterusnya (NGS) ialah kaedah asid nukleik biasa untuk pengesanan RNA coronavirus novel.RT-PCR ialah jenis ujian pertama untuk COVID-19, disyorkan oleh Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO) dan Pusat Kawalan dan Pencegahan Penyakit (CDC) AS.
02. Pengesanan antibodi serologi
Antibodi adalah protein pelindung yang dihasilkan dalam tubuh manusia sebagai tindak balas kepada jangkitan virus.IgM ialah jenis antibodi awal manakala IgG ialah antibodi jenis terkemudian.Sampel serum atau plasma biasanya diperiksa untuk kehadiran jenis IgM dan IgG spesifik antibodi untuk penilaian fasa akut dan pemulihan jangkitan COVID-19.Kaedah pengesanan berasaskan antibodi ini termasuk ujian immunochromatography emas koloid, imunochromatography mikrosfera lateks atau pendarfluor, ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) dan ujian chemiluminescence.
03. Pengesanan antigen virus
Antigen ialah struktur pada virus yang dikenali oleh tubuh manusia yang mencetuskan sistem pertahanan imun untuk menghasilkan antibodi untuk membersihkan virus daripada darah dan tisu.Antigen virus yang terdapat pada virus boleh disasarkan dan dikesan dengan menggunakan immunoassay.Seperti RNA virus, antigen virus juga terdapat dalam saluran pernafasan individu yang dijangkiti dan boleh digunakan untuk mendiagnosis fasa akut jangkitan COVID-19.Oleh itu, selalunya disyorkan untuk mengumpul spesimen pernafasan atas seperti air liur, sapuan nasofaring dan oropharyngeal, kahak batuk dalam, cecair lavage bronchoalveolar(BALF) untuk ujian antigen awal.
Pemilihan kaedah ujian untuk novel coronavirus
Memilih kaedah ujian melibatkan banyak faktor, termasuk tetapan klinikal, kawalan kualiti ujian, masa pusing ganti, kos ujian, kaedah pengumpulan pensampelan, keperluan teknikal kakitangan makmal, keperluan kemudahan dan peralatan.Pengesanan asid nukleik atau antigen virus adalah untuk memberikan bukti langsung tentang kehadiran virus dan mengesahkan diagnosis jangkitan coronavirus novel.Walaupun terdapat banyak kaedah untuk pengesanan antigen, sensitiviti pengesanan mereka terhadap coronavirus novel secara teorinya lebih rendah daripada penguatan RT-PCR.Ujian antibodi ialah pengesanan antibodi anti-virus yang dihasilkan dalam tubuh manusia, yang ketinggalan dalam masa dan selalunya tidak boleh digunakan untuk pengesanan awal semasa fasa akut jangkitan virus.Tetapan klinikal untuk aplikasi pengesanan boleh berbeza-beza, dan tapak pengumpulan sampel juga mungkin berbeza.Untuk pengesanan asid nukleik dan antigen virus, spesimen perlu dikumpul dalam saluran pernafasan yang terdapat virus, seperti swab nasofaring, swab orofaringeal, sputum atau cecair lavage bronchoalveolar (BALF).Untuk pengesanan berasaskan antibodi, spesimen darah perlu dikumpul dan diperiksa untuk kehadiran antibodi anti-virus tertentu (IgM/IgG).Walau bagaimanapun, keputusan ujian antibodi dan asid nukleik boleh saling melengkapi.Contohnya, apabila keputusan ujian adalah asid nukleik-negatif, IgM-negatif tetapi IgG-positif, keputusan ini menunjukkan bahawa pesakit pada masa ini tidak membawa virus itu, tetapi telah pulih daripada jangkitan novel coronavirus.[2]
Kelebihan dan kekurangan ujian coronavirus novel
Dalam Protokol Diagnosis dan Rawatan untuk Novel Coronavirus Pneumonia (Versi Percubaan7) (Dikeluarkan oleh Suruhanjaya Kesihatan Kebangsaan & Pentadbiran Negeri Perubatan Tradisional Cina pada 3 Mac 2020), ujian asid nukleik digunakan sebagai kaedah standard emas untuk diagnosis novel jangkitan coronavirus, manakala ujian antibodi juga dianggap sebagai salah satu kaedah pengesahan untuk diagnosis.
Penemuan patogenik dan serologi
(1) Penemuan patogen: Asid nukleik coronavirus novel boleh dikesan dalam swab nasofaring, kahak, rembesan saluran pernafasan bawah, darah, najis dan spesimen lain menggunakan kaedah RT-PCRand/atau NGS.Adalah lebih tepat jika spesimen diperolehi dari saluran pernafasan bawah (pengekstrakan kahak atau saluran udara).Spesimen hendaklah diserahkan untuk ujian secepat mungkin selepas pengumpulan.
(2) Penemuan serologi: IgM khusus virus NCP dapat dikesan sekitar 3-5 hari selepas permulaan;IgG mencapai titrasi sekurang-kurangnya 4 kali ganda semasa pemulihan berbanding dengan fasa akut.
Walau bagaimanapun, pemilihan kaedah ujian bergantung pada lokasi geografi, peraturan perubatan dan tetapan klinikal.Di Amerika Syarikat, NIH mengeluarkan Garis Panduan Rawatan Penyakit Koronavirus 2019 (COVID-19) (Tapak Kemas Kini: 21 April 2020 ) dan FDA mengeluarkan Polisi untuk Ujian Diagnostik untuk Penyakit Koronavirus-2019 semasa Kecemasan Kesihatan Awam (dikeluarkan pada 16 Mac 2020 ), di mana ujian serologi antibodi IgM/IgG dipilih hanya sebagai ujian saringan.
Kaedah Pengesanan Asid Nukleik
RT_PCR ialah ujian asid nukleik yang sangat sensitif yang direka untuk mengesan sama ada RNA coronavirus novel terdapat dalam pernafasan atau spesimen lain atau tidak.Keputusan ujian PCR yang positif bermakna kehadiran RNA coronavirus novel dalam sampel untuk mengesahkan jangkitan COVID-19.Keputusan ujian PCR negatif tidak bermakna ketiadaan jangkitan virus kerana ia boleh dipengaruhi oleh kualiti sampel yang lemah atau titik masa penyakit pada fasa pulih, dsb.Walaupun RT-PCR adalah ujian yang sangat sensitif, ia mempunyai beberapa kelemahan.Ujian RT-PCR boleh menjadi intensif buruh dan memakan masa, amat bergantung pada kualiti tinggi sampel.Ini boleh menjadi satu cabaran kerana jumlah RNA virus bukan sahaja sangat berbeza antara pesakit yang berbeza tetapi juga boleh berbeza dalam pesakit yang sama bergantung pada titik masa apabila sampel dikumpul serta fasa jangkitan atau permulaan simptom klinikal.Mengesan novel coronavirus memerlukan spesimen berkualiti tinggi yang mengandungi jumlah RNA virus utuh yang mencukupi.
Ujian RT-PCR mungkin memberikan keputusan negatif yang salah (negatif palsu) untuk sesetengah pesakit yang mempunyai jangkitan COVID-19.Seperti yang kita ketahui, tapak jangkitan utama novel coronavirus terletak di paru-paru dan saluran pernafasan yang lebih rendah, seperti alveoli dan bronkus.Oleh itu, spesimen kahak daripada batuk dalam atau cecair lavage bronchoalveolar (BALF) dianggap mempunyai sensitiviti tertinggi untuk pengesanan virus.Walau bagaimanapun, dalam amalan klinikal, sampel sering dikumpul dari saluran pernafasan atas dengan menggunakan swab nasofaring atau oropharyngeal.Mengumpul spesimen ini bukan sahaja tidak selesa untuk pesakit tetapi juga memerlukan kakitangan yang terlatih khas.Untuk menjadikan pensampelan kurang invasif atau lebih mudah, dalam beberapa kes pesakit boleh diberi swab oral dan membenarkan mereka mengambil sampel dari mukosa bukal atau swabbing lidah sendiri.Tanpa RNA virus yang mencukupi, RT-qPCR boleh mengembalikan keputusan ujian negatif palsu.Di wilayah Hubei, China, sensitiviti RT-PCR dalam pengesanan awal dilaporkan hanya kira-kira 30%-50%, dengan purata 40%.Kadar negatif palsu yang tinggi berkemungkinan besar disebabkan oleh pensampelan yang tidak mencukupi.
Di samping itu, ujian RT-PCR memerlukan kakitangan yang sangat terlatih untuk melakukan langkah pengekstrakan RNA yang kompleks dan prosedur amplifikasi PCR.Ia juga memerlukan tahap perlindungan biokeselamatan yang lebih tinggi, kemudahan makmal khas, dan instrumen PCR masa nyata.Di china, ujian RT-PCR untuk pengesanan COVID-19 perlu dilakukan di makmal biokeselamatan tahap 2 (BSL-2), dengan perlindungan kakitangan menggunakan amalan tahap keselamatan bio 3 (BSL-3).Di bawah keperluan ini, dari awal Januari hingga awal Februari 2020, kapasiti makmal CDC Wuhan China hanya dapat mengesan beberapa ratus kes setiap hari.Biasanya, ini tidak akan menjadi masalah apabila menguji penyakit berjangkit lain.Walau bagaimanapun, apabila berhadapan dengan pandemik global seperti COVID-19 dengan kemungkinan berjuta-juta orang untuk diuji, RT-PCR menjadi isu kritikal kerana keperluannya untuk kemudahan makmal khas atau peralatan teknikal.Kelemahan ini mungkin mengehadkan RT-PCR untuk digunakan sebagai alat yang cekap untuk pemeriksaan, dan juga boleh menyebabkan kelewatan dalam laporan keputusan ujian.
Kaedah pengesanan antibodi serologi
Dengan kemajuan perjalanan penyakit, terutamanya pada peringkat pertengahan dan akhir, kadar pengesanan antibodi adalah sangat tinggi.Kajian di Hospital Wuhan Central South menunjukkan bahawa kadar pengesanan antibodi boleh mencapai lebih daripada 90% pada minggu ketiga jangkitan COVID-19.Juga, antibodi adalah hasil tindak balas imun manusia terhadap novel coronavirus.Ujian antibodi menawarkan beberapa kelebihan berbanding RT-PCR.Pertama, ujian antibodi serologi mudah dan cepat.Ujian aliran sisi antibodi boleh digunakan untuk titik penjagaan untuk menyampaikan keputusan dalam masa 15 minit.Kedua, sasaran yang dikesan oleh ujian serologi ialah antibodi, yang diketahui lebih stabil daripada RNA virus.Semasa pengumpulan, pengangkutan, penyimpanan dan ujian, spesimen untuk ujian antibodi secara amnya lebih stabil daripada spesimen untuk RT-PCR.Ketiga, kerana antibodi diagihkan sama rata dalam peredaran darah, terdapat kurang variasi pensampelan berbanding ujian asid nukleik.Jumlah sampel yang diperlukan untuk ujian antibodi adalah agak kecil.Sebagai contoh, 10 mikroliter darah tusukan jari adalah mencukupi untuk digunakan dalam ujian aliran sisi antibodi.
Secara umum, ujian antibodi dipilih sebagai alat tambahan untuk pengesanan asid nukleik untuk meningkatkan kadar pengesanan novel coronavirus semasa kursus penyakit.Apabila ujian antibodi digunakan bersama-sama dengan ujian asid nukleik, ia boleh meningkatkan ketepatan ujian untuk diagnosis COVID19 dengan mengurangkan kemungkinan keputusan positif palsu dan negatif palsu.Panduan operasi semasa tidak mengesyorkan menggunakan dua jenis ujian secara berasingan sebagai format pengesanan bebas tetapi harus digunakan sebagai format gabungan.[2]
Rajah2:Tafsiran yang betul bagi keputusan ujian asid nukleik dan antibodi untuk pengesanan jangkitan coronavirus novel
Rajah 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Kit ujian dwi pantas antibodi IgM/IgG novel coronavirus (StrongStep®Ujian Pantas Antibodi SARS-CoV-2 IgM/IgG, Imunochromatography Lateks)
Rajah 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novel Coronavirus (SARS-CoV-2) Kit PCR Masa Nyata Berbilang (pengesanan untuk tiga gen, kaedah probe pendarfluor).
Catatan:Kit PCR yang sangat sensitif dan sedia untuk digunakan ini tersedia dalam format lyophilized (proses pengeringan beku) untuk penyimpanan jangka panjang.Kit boleh diangkut dan disimpan pada suhu bilik dan stabil selama satu tahun.Setiap tiub pracampuran mengandungi semua reagen yang diperlukan untuk penguatan PCR, termasuk Reverse-transcriptase, Taq polymerase, primer, probe dan substrat dNTPs. Pengguna hanya boleh menyusun semula campuran dengan menambahkan air gred PCR bersama templat dan kemudian memuatkan ke instrumen PCR untuk menjalankan amplifikasi.
Sebagai tindak balas kepada wabak novel coronavirus, Liming Bio-Products Co., Ltd. telah bekerja dengan pantas untuk membangunkan dua kit diagnostik untuk membolehkan makmal kesihatan klinikal dan awam mendiagnosis jangkitan COVID-19 dengan cepat.Kit ini sangat sesuai digunakan untuk saringan berskala besar di negara dan wilayah di mana wabak coronavirus novel merebak dengan cepat, dan untuk menyediakan diagnosis dan pengesahan untuk jangkitan COVID-19.Kit ini hanya untuk digunakan di bawah Keizinan Penggunaan Kecemasan Pra-diberitahu (PEUA).Ujian adalah terhad kepada makmal yang diperakui di bawah peraturan pihak berkuasa negara atau tempatan.
Kaedah pengesanan antigen
1. Pengesanan antigen virus dikelaskan dalam kategori pengesanan langsung yang sama seperti pengesanan asid nukleik.Kaedah pengesanan langsung ini mencari bukti patogen virus dalam spesimen dan boleh digunakan untuk diagnosis pengesahan.Walau bagaimanapun, pembangunan kit pengesanan antigen memerlukan antibodi monoklonal berkualiti tinggi dengan pertalian yang kuat dan sensitiviti tinggi yang mampu mengenali dan menangkap virus patogen.Ia biasanya mengambil masa lebih daripada enam bulan untuk memilih dan mengoptimumkan antibodi monoklonal yang sesuai untuk digunakan dalam penyediaan kit pengesanan antigen.
2. Pada masa ini, reagen untuk pengesanan langsung novel coronavirus masih dalam peringkat penyelidikan dan pembangunan.Oleh itu, tiada kit pengesanan antigen telah disahkan secara klinikal dan tersedia secara komersial.Walaupun sebelum ini dilaporkan bahawa firma diagnostik di Shenzhen telah membangunkan kit pengesanan antigen dan diuji secara klinikal di Sepanyol, kebolehpercayaan dan ketepatan ujian tidak dapat disahkan kerana wujudnya isu kualiti reagen.Sehingga kini, NMPA (bekas FDA China) belum lagi meluluskan sebarang kit pengesanan antigen untuk kegunaan klinikal.Kesimpulannya, pelbagai kaedah pengesanan telah dibangunkan.Setiap kaedah mempunyai kelebihan dan batasannya.Hasil daripada kaedah yang berbeza boleh digunakan untuk pengesahan dan pelengkap.
3. Menghasilkan kit ujian COVID-19 yang berkualiti sangat bergantung pada pengoptimuman semasa penyelidikan dan pembangunan.Liming Bio-Product Co.,Ltd.kit ujian diperlukan untuk memenuhi piawaian pembuatan dan kawalan kualiti yang ketat untuk memastikan ia memberikan tahap prestasi dan konsistensi tertinggi.Para saintis di Liming Bio-Product Co., Ltd. mempunyai pengalaman lebih dua puluh tahun dalam mereka bentuk, menguji dan mengoptimumkan kit diagnostik in vitro untuk memastikan tahap prestasi tertinggi dalam kuantifikasi analisis.
Semasa Pandemik COVID-19, kerajaan China menghadapi lonjakan permintaan yang besar untuk bahan pencegahan wabak di kawasan panas antarabangsa.Pada 5 April, pada sidang akhbar Mekanisme Pencegahan dan Kawalan Bersama Majlis Negeri "Memperkukuh Pengurusan Kualiti Bahan Perubatan dan Mengawal Susunan Pasaran", Jiang Fan, pemeriksa peringkat pertama Jabatan Perdagangan Luar Kementerian of Commerce, berkata, "Seterusnya, kami akan menumpukan usaha kami pada dua aspek, pertama, untuk mempercepatkan sokongan lebih banyak bekalan perubatan yang diperlukan oleh masyarakat antarabangsa, dan juga, untuk meningkatkan kawalan kualiti, kawal selia dan pengurusan produk. Kami akan membuat sumbangan China untuk bersama-sama bertindak balas terhadap wabak global dan membina komuniti dengan masa depan bersama untuk manusia.
Rajah 5:Reagen coronavirus novel Liming Bio-Products Co.,Ltd. telah memperoleh sijil pendaftaran EU CE
Sijil kehormat
Houshenshan
Rajah 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. menyokong Hospital Gunung Wuhan Vulcan(HouShenShan) untuk memerangi wabak COVID-19 dan telah dianugerahkan sijil kehormat Palang Merah Wuhan.Hospital gunung Wuhan Vulcan ialah hospital paling terkenal di China yang pakar dalam rawatan pesakit COVID - 19 yang teruk.
Memandangkan wabak novel coronavirus terus merebak ke seluruh dunia, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. Sedang melangkah untuk menyokong dan membantu komuniti di seluruh dunia dengan teknologi inovatif kami untuk melawan ancaman global yang tidak pernah berlaku sebelum ini.Ujian pantas jangkitan COVID-19 adalah bahagian penting dalam menangani ancaman ini.Kami terus menyumbang secara signifikan dengan menyediakan platform diagnostik berkualiti tinggi ke tangan pekerja penjagaan kesihatan barisan hadapan supaya orang ramai boleh menerima keputusan ujian kritikal yang mereka perlukan.Usaha Liming Bio-products Co., Ltd. dalam memerangi pandemik COVID-19 adalah untuk menyumbangkan teknologi, pengalaman dan kepakaran kami kepada komuniti antarabangsa untuk pembinaan komuniti global yang ditakdirkan.
Tekan Lama~Imbas dan Ikuti Kami
e-mel: sales@limingbio.com
laman web: https://limingbio.com
Masa siaran: Mei-01-2020
